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Benzonase核酸酶

產品編號 產品名稱 規格 價格(元) 說明書
C2001 Benzonase核酸酶
(科研級)
25KU 200 Benzonase核酸酶說明書
100KU 650
10000KU(工業級) 40,000
C2002 無內毒素Benzonase核酸酶 25KU 500 無內毒素Benzonase核酸酶說明書
100KU 1500
5000KU(工業級) 45,000
C2003 Strep tagII Benzonase核酸酶
(科研級)
25KU 300 Strep標簽Benzonase核酸酶說明書
100KU 1000
5000KU(工業級) 30,000
C2004 無內毒素Strep tagII Benzonase核酸酶 25KU 600 無內毒素Strep標簽Benzonase核酸酶說明書
100KU 2000
5000KU(工業級) 60,000
C2006 Benzonase核酸酶凍干品 100KU 950 Benzonase核酸酶凍干品
C2005 Benzonase核酸酶殘留檢測試劑盒 50T 3200 Benzonase核酸酶殘留檢測試劑盒說明書
C0402 Strep-Tactin XT Resin 5ml 1500 Strep-Tactin XT Resin說明書
Benzonase核酸酶,是一種核酸內切酶,可將核酸降解成2~5個堿基的5‘單磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(雙鏈,單鏈,線狀,環狀)的DNA和RNA而沒有蛋白裂解活性,又被稱為“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白樣品粘度,去除蛋白樣品中核酸的污染,且無蛋白酶活性殘留,核酸酶活性達1×106 U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同時, 也具有多種其他用途,如:減少了樣品處理時間,增加了蛋白產量,離心時時沉淀和上清分離的更徹底,更便于溶液的離心(尤其是超濾);提高色譜純化的效率等。
本公司Benzonase核酸酶包括四種,分別為不含任何標簽的Benzonase核酸酶(科研級別)、無內毒素Benzonase核酸酶Strep tagII Benzonase核酸酶(科研級別)和無內毒素的Strep tagII Benzonase核酸酶,可適應不同下游用途的需求。其中Strep tagII Benzonase核酸酶可在消化完核酸后通過Strep Tactin XT Resin高效去除,而無內毒素的兩種Benzonase核酸酶,內毒素含量<40EU/mL(按照單位換算量計算為,每1000U中含有的內毒素<0.15EU),可適用于藥用級別的研發和生產。另外,核酸酶殘留可通過我公司開發的基于 熒光探針的Benzonase核酸酶殘留檢測試劑盒進行評測,15min即可完成檢測,最低可檢測到2ng/ml的核酸酶殘留。

用量推薦

實驗類型電泳蛋白樣品制備非藥物蛋白生產藥物蛋白生產 疫苗、病毒生產細胞藥物
推薦產品Benzonase(科研級)Benzonase(科研級)
Strep-tagII Benzonase(科研級)
Benzonase(無內毒素級)
Strep-tagII Benzonase(無內毒素級)
細胞數量1X106個細胞(10mg組織)1g濕重 (重懸液10mL)1L 發酵上清液1L 培養物
最低用量125U (0.5 μL)25U/mL(1 μL)25U/mL(1 μL)0.1U/mL(0.4 μL)0.1U/mL(0.4 μL)
推薦用量500U (2 μL)250U/mL(10 μL)250U/mL(10 μL)25U/mL(100 μL)5U/mL(20 μL)
作用時間通常作用時間37℃在15~60min;25℃在30~120min;

單位定義

37℃,pH 8.0反應條件下,在30分鐘內使△A260 值降低1.0(相當于完全消化37 μg DNA )的酶量定義為一個活性單位。
注意:含大量蛋白、細胞壁、其它鹽分的粗制品,對該酶活性有部分抑制作用,使用時需要增加酶的用量。

應用

  • 蛋白提取時去除核酸污染:在重組蛋白純化或組織細胞樣品蛋白提取時,Benzonase核酸酶可有效降低樣品粘度,利于下游操作
  • 與細胞或細菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白質產量
  • 減少存放的外周血單細胞(PBMC)的結塊現象
  • 降解核酸,利于不可溶性蛋白復性前高質量包涵體制備
  • 有效去除帶負電荷的核酸對雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響,改善蛋白質的分離效果,增強2-DE分辨率
  • 疫苗和病毒樣品制備中DNA污染的去除
  • 儲存

    置于-20°C,可保存2年。

    實例分析

    benzonase核酸酶消化DNA benzonase核酸酶增加2D電泳的分辨率
    Fig1. 分別取不同量(0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U)的Benzonase核酸酶消化人基因組DNA10min,進行瓊脂糖電泳。 Fig2. A為未加Benzonase處理的,B為加Benzonase處理的
    樣品進行二維電泳。如圖所示,Benzonase處理的樣品可顯
    著增加二維電泳的分辨率。
                 Benzonase核酸酶降解基因組DNA Benzonase核酸酶降解基因組DNA
    Fig3.經RIPA裂解未經Benzonase核酸酶處理的樣品,
    大量基因組DNA釋放出來,呈鼻涕狀。
    Fig4.離心后,左管為未加Bezonase核酸酶,有鼻涕狀
    粘稠物質懸浮在管中,右管為加Bezonase核酸酶,上
    清為透明液體。

    超強兼容性

    全能核酸酶在非常廣泛的條件下,都能保持很高的穩定性和消化核酸的活性,這使其能夠與多種細胞裂解液,如RIPA,或含有多種離子和非離子型去污劑、還原劑的蛋白提取試劑等兼容。例如:>100mM的鹽酸胍會完全抑制Benzonase活性,1mM的EDTA會部分抑制Benzonase活性,5mM的EDTA會使活性喪失90%,1mM的PMSF則不會抑制核酸酶活性。 濃度<0.4%的Triton? X-100對核酸酶活性幾乎無影響,<0.4%的脫氧膽酸鈉使核酸酶可保持70%的活性,超過該臨界值之后核酸酶活性會急劇降低,1%的濃度會使活性喪失70%;0.05%的SDS對核酸酶活性幾乎無影響,而SDS濃度在0.1%-1%之間時,核酸酶在變性后活性會急劇降低,可通過增加核酸酶的量使活性得到補償。另外,核酸酶可耐受6M尿素,當尿素達到7M時,核酸酶在變性后活性會急劇降低,亦可通過增加核酸酶的量使活性得到補償。
    條件參數 最適條件 可作用條件范圍
    Mg2+ 1-2mM 1-10mM
    pH 8.0–9.2 6–10
    溫度 37°C 0–42°C
    DTT 0–100mM >100mM
    β-Mercaptoethanol 0–100mM >100mM
    一價陽離子濃度(如Na+,K+) 0–20mM 0–150mM
    PO43- 0–10 mM 0–100mM

    Benzonase的去除

    對于Strep-tag II標簽的Benzonase核酸酶(C2003,C2004)可通過Strep Tactin XT Resin(HaiGene,C0402)直接 去除,去除率>95%;對于不帶標簽的Benzonase核酸酶(C2001,C2002),可通過色譜純化去除核酸酶,然后可通過檢測殘留活性(HaiGene, C2005)或ELISA檢測來判斷去除是否成功。常見的色譜純化方式有陽離子交換介質和陰離子交換介質,具體的Benzonase去除條件如下表:
    陰離子交換介質 pH 樣品和平衡緩沖液 Benzonase核酸酶
    TMAE 7.0 50mM Tris/200mM NaCl not bound
    TMAE 7.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    TMAE 8.0 50mM Tris/250mM NaCl not bound
    TMAE 8.0 >50mM Tris/100mM NaCl not bound
    TMAE 9.0 >50mM Tris/200mM NaCl not bound
    TMAE 9.0 50mM Tris/100mM NaCl not bound
    DEAE 7.0 50mM Tris/200mM NaCl not bound
    DEAE 7.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    DEAE 8.0 50mM Tris/250mM NaCl not bound
    DEAE 8.0 >50mM Tris/100mM NaCl not bound
    DEAE 9.0 >50mM Tris/250mM NaCl not bound
    DEAE 9.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    DMAE 8.0 >50mM Tris/250mM NaCl not bound
    DMAE 8.0 50mM Tris/50mM NaCl not bound
    陽離子交換介質 pH 樣品和平衡緩沖液 Benzonase核酸酶
    SO3- 6.0 20mM phosphate/100mM NaCl bound
    SO3- 6.0 20mM phosphate/200mM NaCl not bound
    SO3- 5.0 20mM acetate/200mM NaCl bound
    SO3- 5.0 >20mM acetate/700mM NaCl not bound
    SO3- 4.0 >20mM acetate/300mM NaCl bound
    SO3- 4.0 20mM acetate/800mM NaCl not bound
    C00- 6.0 20mM phosphate/0mM NaCl not bound
    C00- 5.0 20mM acetate/40mM NaCl bound
    C00- 5.0 20mM acetate/100mM NaCl not bound
    C00- 4.0 >20mM acetate/150mM NaCl partially bound
    C00- 4.0 20mM acetate/400mM NaCl not bound

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